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1 DogmacentraldaBiologia QuímicaeReplicaçãodomaterialgenético DNA -Estrutura -Replicação -Transcrição -Tradução DNA Nucleotídio=basenitrogenadas+pentose+fosfato Adenosina Guanosina CitidinaTimidina Purinas Pirimidinas D-ribose D-furanoribose 2-deoxiribose 2 DNA Pareamentodebases DNA Polimerização 3´-ACGT-5´ 5´-TGCA-3´ 3´-ACGGTATCGCTATTAGATC-5´ 5´-TGCCATAGCGATAATCTAG-3´ RegradeChargaff DNA Duplahélice DNA Desnaturaçãoeanelamento 3 DNA Hibridização RNA Adenosina Guanosina CitidinaTimidina Purinas Pirimidinas Uridina DNA 5'-tcctgtatcttgtatgtctatgagcgatctgtatctatgtatctatatctgtctat-3‘ 3'-aggacatagaacatacagatactcgctagacatagatacatagatatagacagata-5' RNA5´-uguaugucuauga-3´ DNA -Estrutura -Replicação -Transcrição -Tradução DNA Replicação 4 DNApolimerasepodeagir comoumaexonuclease Sítiodepolimerização Sítiodehidrólise Translaçãodecortes( nick) ReplicaçãosemicontínuaeosfragmentosdeOkazaky DNA DNApolimerase ComplexoDNApolimerase Ligaçãodosfragmentosde Okazaky 5 ReplicaçãobidirecionaldoDNAbacteriano Iniciaçãoprocarióticadareplicação -Eucarióticos -27componentesnoreplissomo -Recrutamentodehistonas 6 Origemdereplicaçãoemeucariotos Replicaçãoemeucariotos Complexopré-replicativo(pré-RC)elicenciamento dereplicação ORC– complexodereconhecimentodeorigem Cdc– celldivisioncycle MCM– manutençãodeminicromossomo (helicases) Replicaçãodostelômeros -reptições emTandem dos terminaiscromossômicoshumanos 10a15kb deTTAGGG -Telomerase 7 DNA Desnaturaçãoeanelamento DNA Hibridização PCR DNApolimerase 8 PCR Primase:substituídapelaadiçãodeiniciadoressintétic os (oligonucleotídios) Helicase:substituídapeladesnaturaçãotérmica,seguinda de anelamento daamostradeDNA 95oC 72oC MP- 2 oC I II III I.Desnaturação II.Anelamento III.Elongamento DNA PCR Temperaturadeanelamento 3'-aggacatagaacatacagatactcgctagacatagatacatagatatagacagata-5' 5'-tcctgtatcttgtatgtctatgagcgatctgtatctatgtatctatatctgtctat-3' 3'-aggacatagaacatacagatactcgctagacatagatacatagatatagacagata-5' 5'-tcctgtatc-3' 3'-gacagata-5' 5'-tcctgtatcttgtatgtctatgagcgatctgtatctatgtatctatatctgtctat-3' DNA primer DNA PCR 9 DNA Seqüenciamento ddGTP DNA Seqüenciamento 10 DNA Seqüenciamentoautomático DNA Seqüenciamentoautomático DNA Seqüenciamentoautomático “High-throughput!” DNA -Estrutura -Replicação -Transcrição -Tradução 11 MarcaçãoradioativadoRNA RNA– ácidoribonucléico - RNAmensageiro(RNAm) - RNAtransportador(RNAt) - RNAribossômico(RNAr) - Pequenos RNAs nucleares (snRNA) - RNAs funcionais - miRNA esiRNA DNA Adenosina Guanosina CitidinaTimidina Purinas Pirimidinas Uridina DNA RNA5 ´-uguaugucuauga-3´ 3'-aggacatagaacatacagatactcgctagacatagatacatagatatagacagata-5' 5'-tcctgtatcttgtatgtctatgagcgatctgtatctatgtatctatatctgtctat-3‘ ReplicaçãoxTranscrição -Mecanismoquímico -Polaridade(direçãodepolimerização) -Usodeummolde -Necessidadede primer -Fasesdeiniciação,elongaçãoetérmino -Especificidadedosegmentoutilizadocomomolde -Substratos(ATP,GTP,CTPeUTP) 12 Fitamolde( template)efitacodante( coding) Genomadoadenovírushumano Promotoresdetranscriçãoemprocariotos ATG Ligação Iniciação Elongamento RNA-polimerase(RNAP) 13 RNAtranscrito primário Términodatranscrição Mecanismointrínseco(grampodeCGs) 14 RNA-polimerase(RNAP) - RNAPI(nucléolo):sintetizaprecursoresdeRNAr - RNAPII(nucleoplasma):sintetizaprecursoresRNAm - RNAPIII(nucleoplasma):sintetizaRNAteRNAi Transcriçãoemprocariotos Promotoresemeucariotos TATAboxe Complexode transcrição RNA-polimerase(RNAP) 15 ProcessamentodeRNAm -Capuz -Caudas -Splicing Transcritoprimário RNAmmaduro Capuz5 ´ Splicing - ÍntronseÉxons - ÍntronsdostiposIeII Recomposição Splicing 16 TipoI TipoII ÍntronsdotipoIII: - Spliceossomo - snRNA( smallnuclear RNA– U1,U2,U4,U5eU6) - sRNP( smallribonuclearnuclearprotein ) ÍntronsdotipoIII: 17 ÍntronsdotipoIVdiferemdostiposIeIIpoisseu processamentorequerhidrólisedeATPeumaendonuclease Caudapoli-A(RNApoli-Apolimerase) -Sequênciasdemarcaçãodeclivagem AAUAAA– 10-30pbamontante - Númerodeadenosinasvariaentre8e25 ProcessamentodeRNAm Processamento alternativo deRNA 18 Expressãoseletivadecalcitoninaepeptídeodo generelacionadoà calcitonina(CGRP)porcélulas datoreóideedoSNC Processamentoalternativodetropomiosina emratos ProcessamentodoRNAteRNAr Procariotos Eucariotos RNAr RNAt RNAspodempossuiratividadeenzimática(ribozimas) - ÍntronsdotipoI - RNAsePpossuicomponentesprotéicoseRNA - RNArcatalisaapolimerizaçãodecadeiaspeptídicas 19 Transcriçãoreversa VírusRNA(retrovírus) Regulaçãodatranscriçãogênica Fatoresdetranscriçãogênica ZíperdeleucinasbZIP Hélice-volta-hélice Dedodezinco Operon dotriptofano (Trip) Operon dalactose(Lac) 20 Fatoresdetranscrição Operonlacinduzidoporlactoseoupor IPTG(isopropiltiogalactopiranosídeo) Operons Diferençasentrearegulaçãogênicaemprocariotos ee ucariotos -Eucariotos possuem3tiposdeRNApolimerase -RNApolimerase deeucariotos necessitadamontagemdo complexodetranscriçãocomosTBPefatoresgeraisde transcrição. -Sítiosreguladoresemeucariotos podemestarlocalizadosa milharesdenucleotídios distantesdopromotor,amontan teou ajusante. -Acompactaçãodacromatida influencianaregulaçãode determinadosgenesemeucariotos. Ativadoresdetranscriçãoemeucariotos - enhancers enhancer Transcriçãopodeserreguladapormúltiplosfatoresde transcriçãoregulatórios 21 Oncogenes ereceptoresnucleares Myc-Max eMad-Max RXR,VDR,ER,LXR,TR,etc... DNA -Estrutura -Replicação -Transcrição -Tradução RNAribossômico(RNAr) RNAtransportador(RNAt) 22 Iníciodatradução Procariotos Eucariotos 23 Finaldatradução Fatordeliberação Polirribossomos,enovelamentoprotéicoechaperones -Oenovelamentoprotéicoocorre simultaneamenteà tradução
