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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO AULA 3 - IDENTIFICAÇÃO DO MATERIAL GENÉTICO Professora: Rafaela Priscila Antonio Mossoró – RN 2012 Biologia Estrutura e função estão intimamente relacionados. Gene Composição química, estrutura e função estão intimamente relacionados. Identificação do Material Genético Qual a constituição química e estrutura do gene - material genético? Como ele funciona para produzir os fenótipos que nós observamos? Por que existe tanta diferença entre os indivíduos? Identificação do Material Genético Procurando o Material Genético Identificação do Material Genético �Weismann (1890) - substância no núcleo celular controla o desenvolvimento; � Sutton (1902) Contribuições: �Distribuição dos cromossomos obedeciam às leis de Mendel; �Observação do comportamentos dos cromossomos na meiose e mitose. 1. Fonte estável de informação 2. Capacidade de se replicar com exatidão 3. Capacidade de sofrer mudanças Procurando o Material Genético 1. Fonte estável de informação 2. Capacidade de se replicar com exatidão 3. Capacidade de sofrer mudanças Eventos na linha do tempo: 1928 Griffith e seu Experimento de transformação – Princípio transformante; 1944 Avery e seu experimento de transformação – Identificação do Princípio transformante; 1953 Hershey-Chase: Experimento com Bacteriófagos; 1953 Watson e Crick propõem o modelo do DNA dupla hélice; 1956 Gierer e Schramm / Fraenkel-Conrat & Singer Demonstram que o RNA é o material genético viral. Identificação do Material Genético Experimento de Griffith - Streptococcus pneumoniae (1928) Linhagem S viva Linhagem R viva Linhagem S morta Linhagem R viva Mistura de Linhagem R viva com linhagem S morta Bactérias vivas S isoladas dos ratos mortos Princípio transformante Identificação do Material Genético Experimento Avery, Mac Leod e McCarty (1944) Identificação do Material Genético Experimento de Hershey & Chase (1952) Bacteriófagos ou fagos Fagos filhos não radioativos Fagos filhos radioativos DNA Capa protéica Identificação do Material Genético Exceções - RNA Material genético Experimento de Fraenckel-Conrat e Singer Proteínas RNA TMV tipo A TMV tipo B RNA tipo A Proteína tipo B RNA tipo B Proteína tipo A TMV híbrido TMV híbrido RNA Proteína A RNA A Proteína B RNA B Vírus do Mosaico do Fumo – TMV = RNA Identificação do Material Genético Estrutura Molecular do DNA James Watson e Francis Crick (1953) Identificação do Material Genético Composição Química e estrutura dos Ácidos Nucléicos - DNA 1 - Desoxiribose 2 – Grupo fosfato 3 – Bases nitrogenadas Identificação do Material Genético Montagem do Nucleotídeo Desoxiribose H Identificação do Material Genético Nucleotídeo – Monômero dos ácidos nucléicos constituído de uma base nitrogenada, uma pentose e um grupo fosfato. Experimento de Erwin Chargaff � Composição do DNA de vários organismos Organismo Porcentagem de base no DNA Razão A T G C A:T G:C Staphylococcus afermentans 12,8 12,9 36,9 37,5 0,99 0,99 Escherichia coli 26,0 23,9 24,9 25,2 1,09 0,99 Levedura 31,3 32,9 18,7 17,1 0,95 1,09 Caenorhabditis elegans 31,2 29,1 19,3 20,9 1,07 0,96 Arabadopsis thaliana 29,1 29,7 20,5 20,7 0,98 0,99 Bovinos 29,0 28,7 21,2 21,2 1,01 1,00 Camundongos 34,4 33,0 16,2 16,4 1,04 0,99 Humanos 29,2 29,4 21,7 19,7 0,99 1,10 Identificação do Material Genético Rosalind Franklin Difração de Raio X do DNA Estudos de Difração de Raios X DNA possui uma estrutura helicoidal Identificação do Material Genético 3’ Pontes de hidrogênio 1 Å = 1x10-10 m A molécula de DNA é constituída por duas fitas enroladas para a direita, formando uma hélice dupla 20Å 5’ 3’ 5’ 3’ 3,4Ǻ 34Ǻ Desvio 36º Diâmetro de 20Å: � Pirimidina + Pirimidina = DNA muito fino � Purina + Purina = DNA muito grosso � Purina + Pirimidina = Espessura do DNA compatível com a difração de raios X Pareamento de bases do DNA Identificação do Material Genético COMPUTADOR X SISTEMA BIOLÓGICO Sistema binário 0 e 1 2n Sistema quaternário 4 bases nitrogenadas 4n O sistema biológico processa o quadrado das informações do computador 4n = (2n)2 Identificação do Material Genético Tamanho do genoma Identificação do Material Genético Figura - Distribuição comparativa do tamanho dos genomas (barras vermelhas e valores no eixo vertical esquerdo) versus o número de genes (barras azuis e valores no eixo vertical direito) em diferentes organismos Modelo Dupla Hélice do DNA: Características. �A molécula de DNA é constituída de: � 2 fitas enroladas para a direita – hélice dupla; � Grupamentos açúcar-fosfato repetidos e de bases orientadas para dentro do eixo central. �As 2 fitas estão sentidos opostos (anti-paralelas): 5’→ 3’ 3’← 5’ �Os pares de base: � Complementares (pareamento específico) são mantidas unidas por pontes de hidrogênio. A pareia com T, e G pareia com C. ex.: 5’-TATTCCGA-3’ 3’-ATAAGGCT-3’ � Distam 3,4 Å; � Uma volta completa da hélice requer 34 Å (10 bases/volta) � Tem um desvio de 36º dessa forma uma volta completa – 360º. Identificação do Material Genético Definição DNA (Ácido desoxirribonucléico) – Material genético primário, da maioria dos organismos, constituído de duas fitas complementares constituídas pelos desoxirribonucleotídeos A, T, G e C. Identificação do Material Genético 1 - Ribose 2 – Grupo fosfato 3 – Bases nitrogenadas Identificação do Material Genético Composição Química e estrutura dos Ácidos Nucléicos - RNA Uracila (U) Montagem do nucleotídeo Identificação do Material Genético Fita simples - RNA Identificação do Material Genético RNA (Ácido ribonucléico) – Ácido nucléico envolvido na transferência da informação genética e sua decodificação em uma cadeia polipeptídica. Em alguns vírus, ele é o material genético primário. RNA -Definição Identificação do Material Genético Por que a maioria desses conhecimentos foi obtido mediante pesquisas realizadas com bactérias e vírus? � Ciclo reprodutivo muito curto; � Fácil manuseio em laboratório de um grande número de descendentes; � Menor complexidade e organização do material genético. Ex: Genoma da E. coli 1350x menor Genoma humano Identificação do Material Genético Funções do material genético (francis crick) Replicação Transcrição Tradução Proteína Identificação do Material Genético Hipóteses para a replicação �Replicação conservativa - a molécula parental de DNA é conservada, e uma única dupla hélice-filha é produzida, consistindo em dois filamentos recém-sintetizados; �Replicação dispersiva – as moléculas filhas consistem em filamentos, cada um contendo filamentos de ambos, DNA parentais e DNA recém-sintetizado; �Replicação semiconservativa – a dupla hélice de cada molécula-filha de DNA contém um filamento da molécula original e um filamento recém sintetizado. Identificação do Material Genético Replicação semiconservativa do DNA DNA hélice dupla Fita nova Fita molde Estrutura do DNA proposta por Watson e Crick Identificação do Material Genético Experimentos de Meselson & Sthal (1958) Meio com N14 Meio com N15 Bactérias E. coli Identificação do Material Genético Replicação Transcrição Tradução Proteína 5’ 3’ Funções do material genético - Replicação do DNA Identificação do Material Genético Transcrição e tradução - Tipos de RNA � RNA mensageiro ou mRNA - lidos pelos ribossomos e trazem a informação para a síntese de uma cadeia polipeptídica; � São os únicos traduzidos em proteínas; � RNA transportadores ou tRNAs - São "carregados" com a.a. de uma forma precisa pela enzima aminoacil-tRNA sintase; � Trazem ao ribossomo o a.a requerido pelo códon apresentado pelo mRNA na cavidade A da sub-unidade maior do ribossomo. � RNA ribossomais ou rRNA - junto com dezenas de diferentes proteínas, formam os ribossomos (macromoléculas que guiam a montagem da cadeia de a.a. pelo mRNA e tRNA); Identificação do Material Genético Transcrição �Processo pelo qual uma molécula de RNA é sintetizada a partir da informação contida na sequência de nucleotídeos de uma molécula de DNA de fita dupla Eletromicrografia (Triturus viridiscens). Identificação do Material Genético Transcrição DNA fita codificadora DNA fita molde RNA transcrito Identificação do Material Genético Transcrição – Processamento do RNA - hnRNA (G – CH3) �Íntrons - recomposição alternativa - variabilidade. Identificação do Material Genético Tradução �Processo na qual uma seqüência de mRNA é convertido em uma cadeia polipeptídica. DNA fita codificadora DNA fita molde RNA transcrito Proteína traduzidaArg-Tyr-Ser-Val Identificação do Material Genético Código genético �São as instruções para sintetizar moléculas protéicas e estão inscritas em código nas moléculas de DNA dos organismos vivos. �Características do código genético �Tríplice: 3 bases = códon codificam um aa �Degenerado ou redundante: um mesmo aminoácido pode ser codificado por vários códons diferentes �Não é ambíguo: cada códon é corresponde a somente um aminoácido �Com sentido: Start códon a um stop códon; �Universal: o mesmo para todos seres vivos �Sem virgulas – não há separação por nucleotídeos que funcionem como “vírgulas”; �Não é sobreposto. Identificação do Material Genético Código genético Identificação do Material Genético Tradução RNA ribossômico rRNA Identificação do Material Genético Visão geral da transcrição e tradução Identificação do Material Genético Exercício 1) A composição de bases de vários ácidos nucléicos isolados de algumas espécies é fornecida a seguir: �Para cada espécie, caracterize o ácido nucléico encontrado. Espéci es BASES (%) A C G T U 1 20 30 30 20 - 2 40 10 10 40 - 3 30 30 20 - 20 4 40 10 40 - 10 5 30 30 20 20 - 2) No sorgo, um determinado alelo apresenta a seguinte sequência de bases: Exon 1 Intron 1 Exon 2 Intron 2 Exon 3 5’ ATGCACCGA AATGAT AGAATT ACGCCC CCACCACCACCACAATAGA 3’ 3’ TACGTGGCT TTACTA TCTTAA TGCGGG GGTGGTGGTGGTGTTATCT5’ a) Qual a sequência de bases do mRNA ? b) Qual o número de aminoácidos que farão parte da proteína codificada por esse alelo? c) Qual a sequência de aminoácidos na proteína?