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BIOLOGIA MOLECULAR O CERNE DA BIOLOGIA MOLECULAR COMPREENDE O ESTUDO DOS PROCESSOS DE REPLICAÇÃO, TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO DO MATERIAL GENÉTICO E A REGULAÇÃO DESSES PROCESSOS. BIOLOGIA MOLECULAR APLICAÇÕES ANÁLISE DE VARIAÇÕES GENÉTICAS Estudos evolutivos Tipagem de DNA Detecção de patógenos e diagnóstico de doenças baseados no DNA ENCONTRANDO GENES Encontrar genes de produtos conhecidos Encontrar genes para produtos desconhecidos Triagem de novas doenças genéticas ENGENHARIA GENÉTICA Regulando a expressão de genes existentes Aumentando a expressão do gene Inativando genes Adicionando novos genes Terapia Gênica ENGENHARIA DE PROTEÍNA 1865 – Gregor Mendel - regras básicas da hereditariedade, substância hereditária que passa de uma geração a outra está organizada em pacotes de informações distintos, hoje conhecidos como genes. 1869 – Frederick Miescher descobriu o DNA (nucleína) 1903 – Walter Sutton lançou a hipótese de que o material hereditário estava associado aos cromossomos. 1910 – Thomas Hunt Morgan, Alfred Sturtevant, Calvin Bridges e Herman Muller mostraram que os genes estavam nos cromossomos. 1928 – Griffith – 1ª evidência que o material genético era constituído por ac. nucléicos – princípio transformante. 1944 - Oswald T. Avery, Colin M. MacLeod e Maclyn McCarty – princípio transformante = DNA = é o material genético. 1953 - James D.Watson e Francis H. C. Crick deduziram a estrutura de dupla-hélice do DNA. 1958 - Matthew Meselson e Frank Stahl replicação do DNA é semiconservativa. 1961 – Marshal Nirenberg e col. e Heinrich Matthaei código genético formado por uma trinca de nucleotídeos. 1977 – Sequenciamento do DNA. 1995 – Sequenciamento de genomas bacterianos. 2001 – Sequenciamento do genoma humano. 2001 2000 HISTÓRICO EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE 1869 – Friedrich Miescher - descoberta do DNA – chamou de nucleína. Identificação e aceitação como material hereditário posteriormente. 1928 – Griffith – experimento em camundongos com o pneumococo Streptococcus pneumoniae (pneumonia) EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE Bactérias vivas do tipo R (não virulentas) + Bactérias mortas do tipo S (virulentas) Morte do camundongo Isoladamente não causam a doença Presença da bactéria S viva no corpo do camundongo PRINCÍPIO TRANSFORMANTE TRANSFORMAÇÃO BACTERIANA EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE 1944 – Avery, MacLeod e McCarty (12 anos de pesquisa) 75 litros de cultura da bactéria S isolaram 25 miligramas de um extrato com altíssimo poder transformante. Tratamentos: - amilase (enzima que degrada polissacarídeos) - protease (enzima que degrada proteínas) - ribonuclease (enzima que degrada RNA) - dnase (enzima que degrada DNA) extrato perdeu o “poder transformante” DNA é a substância transformante! EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE PROTEÍNA OU DNA ? 1952 - extratos que continham apenas 0,02% de proteínas, o que eliminava a possibilidade das proteínas serem as responsáveis pela transformação das bactérias. 1952 – Hershey e Chase – corroboraram a identificação do DNA como material hereditário. Experimento com o vírus bacteriófago T2. EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE ELUCIDAÇÃO DA ESTRUTURA DO DNA 1949 a 1953 – Chargaff – Quantificação das bases nitrogenadas de várias espécies. Organismo Tecido A T G C A+T G+C E. coli - 26,0 23,9 24,9 25,2 1,00 S. pneumoniae - 29,8 31,6 20,5 18,0 1,59 M. tuberculosis - 15,1 14,6 34,9 35,4 0,42 Levedura - 31,3 32,9 18,7 17,1 1,79 Ouriço do mar esperma 32,8 32,1 17,7 18,4 1,85 Arenque esperma 27,8 27,5 22,2 22,6 1,23 Rato medula óssea 28,6 28,4 21,4 21,5 1,33 Homen timo 30,9 29,4 19,9 19,8 1,52 Homen fígado 30,3 30,3 19,5 19,9 1,53 Homen esperma 30,7 31,2 19,3 18,8 1,62 A= T C=G ELUCIDAÇÃO DA ESTRUTURA DO DNA Wilkins e Franklin - estudos de difração de raios-X DNA tem uma estrutura helicoidal 1953 – Watson e Crick - Propuseram a estrutura do DNA como dupla hélice. Modelo molecular com base no tamanho e configuração espacial dos nucleotídeos, levando em conta os dados de Chargaff e de Wilkins e Franklin. Ganharam o prêmio Nobel de fisiologia em 1962. EVIDÊNCIAS DE QUE O DNA É A MOLÉCULA DA HEREDITARIEDADE