PROVAS BIOQUIMICAS

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Identificação 
de microrganismos por 
testes bioquímicos
Universidade Federal de Santa Maria
Centro de Ciências da Saúde
Programa de Pós-Graduação Medicina Veterinária
R= para reduzir o trabalho, o custo e abreviar o
tempo requerido para diagnóstico.
Porque identificar por testes bioquímicos ?
A identificação dos microrganismos é
efetuado através da determinação de um número
mínimo de propriedades.
Importante 
Portanto, quanto menor o número de
observações efetuadas, maior o risco de erros de
identificação.
possuem enzimas específicas utilizadas no processo de 
metabolização dos substratos ou mecanismos de virulência.
Identificação Bioquímica
–> seg. a min.
Provas rápidas 
Parede celular: método de Gram
Bactéria gram-positiva
Esquema de bactéria com
parte da célula removida.
Membrana plasmática
Parede celular
formada por camada
espessa de
peptidoglicano
Esquema de parte da parede celular e da membrana
plasmática de bactéria gram-positiva.
Parede celular: método de Gram
Esquema de bactéria com
parte da célula removida.
Esquema de parte da parede celular e da
membrana plasmática de bactéria gram-negativa.
Membrana plasmática
Camada de 
peptidoglicano
Bactéria gram-negativa
Camada lipoprotéica
externa, espessa,
semelhante à 
m. plasmática, com
lipopolissacarídeos
P
a
r
e
d
e
 
c
e
l
u
l
a
r
OBS: Exceto os estreptococos, a maioria
das bactérias aeróbias e anaeróbias
decompõe o peróxido de hidrogênio
Catalase • Indispensável na 
identificação de cocos 
Gram positivos;
catalase positivos
•catalase negativos;
• Proteína de composição química desconhecida, com atividade
semelhante a protrombina, capaz de transformar o fibrinogênio em
fibrina (coágulo)
_
+ _ +
Coagulase
Presença desta enzima indica patogenicidade
• Na presença de plasma, os produtores de coagulase, como o
Staphylococcus aureus, vão desencadear os mecanismos da
coagulação
• Diferenciar espécies de Staphylococcus (S. aureus e S. epidermidis)
–> 24 h ou mais
Provas lentas 
*Uma vez incorporado, o citrato será degradado pela enzima
Citrase, produzindo compostos alcalinos.
*Teste de Citrato de Simmons
*Diferencia os microrganismos pela capacidade de usarem o
Citrato como única fonte de carbono. Azul de bromotimol como
indicador de pH
*Para que a bactéria
possa utilizar o citrato
é necessário que ela
tenha a Citrato
permease, que vai
permitir a entrada
desse composto no
interior da célula;
Teste TSI (Triple sugar iron)
● H2S na presença de sais de ferro forma sulfeto ferroso, originando um precipitado negro 
insolúvel. 
A
A
K
A
Permite avaliar: 
1-Fermentação da glicose, 2- Produção de gás, 
3- Fermentação de lactose 4- Produção de H2S. 
PROVAS DO MEIO DE TSI - Preparação
1- inoculado por picada central até o fundo 2- espalhamento na superfície 
3- incubação durante 18-24h a 35oC. 
Após o crescimento da bactéria pode-se 
observar os resultados: 
K= alcalina (vermelho) e 
A= ácida (amarelo) 
Análise dos Resultados:
● A/A (inclinação e base ácidas = amarelo). 
● K/A (inclinação alcalina e base ácida); 
● Presença de gases: Levantam ou fragmentam o meio. O resultado é representado como 
A/A com gás. 
Teste da Produção de Urease 
A urease é uma enzima que degrada a uréia em duas moléculas
de amônia e uma de anidrido carbônico.
Colônias são transferidas com uma alça para o meio contendo
uréia, pH neutro e um indicador de pH, o vermelho fenol.
_ +
Na prova negativa não há alteração da cor 
do meio. 
Após o crescimento: Prova positiva 
quando a urease ataca a uréia 
alcalinizando o meio = rosa choque.
A prova positiva é indicada pela viragem da cor do meio (amarelo) devido a produção de 
ácidos, com abaixamento do pH do meio. 
Além disso, o ácido fórmico é transformado em CO2 e Hidrogênio, os quais são coletados 
pelo tubo de Durhan. 
A prova negativa é revelada 
pela ausência de mudança 
de cor (laranja ou vermelho). 
+ + -
Teste da Fermentação de Carboidratos 
Teste da Motilidade
A prova é negativa quando os microrganismos ficam 
restritos ao local da inoculação sem, contudo, turvar o 
meio.
A prova é efetuada inoculando-se em linha reta, através da técnica 
da punctura (com agulha), 2/3 de um meio semi-sólido. 
A prova indica 
motilidade quando os 
microrganismos 
crescem deslocando-se 
da linha de inoculação, 
turvando o meio. 
Teste do Indol
O indol pode ser detectado 
pela formação de um anel rosa 
(pink) na parte superior do 
tubo, após a adição de Reativo 
de Kovac’s
O indol é produzido pela ação da 
triptofanase sobre o triptofano 
existente no meio de cultura, 
ocorrendo, também, a produção 
de ácido pirúvico e amônia.
O meio contém o indicador bromocresol púrpura. Nas etapas iniciais de
incubação, o tubo torna-se amarelo devido à fermentação da glicose. Se o aminoácido
é descarboxilado o meio retorna à cor púrpura.
_ +
Teste da Lisina e Ornitina– descarboxilação
Algumas bactérias possuem a lisina descarboxilase (LDC) que atua sobre a
porção carboxila dos aminoácidos, com formação de aminas, de reação alcalina e
CO2.
A reação ocorre preferencialmente em condições anaeróbias e
ligeiramente ácidas, mas inicialmente ocorre a utilização da glicose do meio para
enriquecimento da cultura e acidificação do meio.