AD1 - biocel I - 06-2 com gab

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Gabarito 1a. Avaliação a Distância – 2006/2 
Disciplina: Biologia Celular I 
 
1) Um pesquisador possui uma biopsia extraída da córnea de um paciente suspeito 
de estar infectado com herpes vírus. É uma amostra muito pequena, logo ele não 
poderia partir para a execução métodos patólogicos diretamente. Como este 
pesquisador poderia: (1) confirmar a presença da infecção viral e (2) como ele 
poderia isolar os vírus das células da córnea? 
 
R - Como a amostra extraída da córnea é muito pequena, o pesquisador deverá 
aumentar a massa viral para trabalhar sua identificação e isolamento. Para isso ele 
terá que estabelecer uma cultura primária da biópsia em questão, permitindo assim 
que ocorra o crescimento das células infectadas com o vírus e conseqüentemente o 
aumento da massa viral, ao longo das diversas passagens em cultura. A presença da 
infecção viral poderá ser feita de maneira prática, visualizando as culturas de células 
de córnea em microscopia de fluorescência, utilizando anticorpos primário contra o 
vírus e secundário (conjugados à moléculas fluorescentes) contra o anticorpo 
primário. O mesmo princípio pode ser utilizado na microscopia eletrônica de 
transmissão, ao conjugar ao anticorpo antivírus moléculas eletrondensas. Os vírus 
poderiam ser isolados utilizando duas seqüências de centrifugação. Inicialmente as 
células seriam rompidas e então submetidas aos processos de centrifugação. A 
primeira centrifugação seria uma centrifugação diferencial em velocidade media para 
retirar núcleos, mitocôndrias e organelas de densidade semelhante, seguida outra 
centrifugação em velocidade muito alta e de longa duração. No pellet encontraríamos 
pequenas partículas como ribossomos, grandes complexos moleculares e os vírus. 
Para separar os vírus destas outras moléculas, uma centrifugação por gradiente é 
submetida e as bandas resultantes são então observadas no MET ou no microscópio 
de fluorescência para checar a presença do vírus. Alternativamente, o pesquisador 
poderia utilizar cromatografia de afinidade, conjugando o anticorpo antivírus às 
resinas cromatográficas. Assim, ao adicionar extratos de células infectadas na coluna, 
apenas os vírus se ligariam à resina, isolando-os do restante. De maneira semelhante, 
a imunoprecipitação poderia também ser utilizada. Assim como nas centrifugações, a 
qualidade do isolamento deve ser checada por MET ou de fluorescência. 
 
2) Um pequeno laboratório de Entomologia conseguiu verba suficiente para comprar 
apenas um equipamento. Ao escolher entre um microscópio óptico de contraste de 
fase e uma lupa decidiram-se pelo microscópio, que era mais caro, mas o dinheiro 
dava. Fizeram bom negócio? Justifique a resposta. 
 
R - O laboratório não fez um bom negócio porque o microscópio óptico de contraste 
de fase necessita de amostras finas e transparentes para a perfeita observação de 
amostras. Amostras espessas, como um inseto, não permitem que a luz emitida 
chegue à lente condensadora, impedindo a magnificação visual observada na lente 
ocular. A lupa independe de transparência para a observação, sendo assim mais 
adequado para o laboratório em questão. 
 
 
3) Um jovem estudante de biologia, no seu estágio de iniciação científica estava 
preparando suas primeiras amostras para observação em microscópio eletrônico 
de varredura e transmissão. Ao observar as amostras, não se observou nada. Nas 
amostras para MEV as células pareciam estar danificadas, como se a reflexão do 
feixe de eletrons na amostra não tivesse acontecido. Já as amostras para MET 
estavam completamente sem contraste. Ao mostrar as fotos para seu orientador, 
ele explicou os motivos para o aparecimento destes artefatos, já que os 
microscópios estavam funcionando perfeitamente. Quais seriam estes motivos? 
 
R - Na amostra para MEV o erro do aluno ocorreu no processo de metalização da 
amostra, que consiste no recobrimento com ouro ou outra molécula condutora para 
gerar sinal no microscópio. Estas moléculas condutoras irão fazer o feixe de elétrons 
ser rebatido, formando a imagem da MEV. Se uma amostra não for bem metalizada, 
os elétrons não irão ser rebatidos e podem então degradar a amostra. No caso da 
MET, o erro ocorreu na etapa de contrastação da amostra, onde soluções contendo 
átomos de alta massa atômica (Pb, U) vão impedir que o feixe de elétrons atravesse a 
amostra, criando a sensação de claro / escuro (contraste). Além disso, o aluno também 
não usou o pós-fixador tetróxido de ósmio (OsO4), que também ajuda na contrastação 
da amostra pelas mesmas razões citadas anteriormente. 
 
 
4) Veja o texto extraído de um página na Internet que vende um gel redutor de 
celulite: 
“LIPOSSOMAS: São microcápsulas que transportam os princípios ativos até a 
profundidade desejada, liberando o seu conteúdo de forma contínua e prolongada. 
Os lipossomas facilitam a penetração de substâncias na pele, desmembrando as 
células de gordura.” 
Esta afirmação está correta? A partir dos seus conhecimentos de biologia celular, 
um lipossoma facilitaria a penetração de substâncias dentro da pele? 
 
R- A afirmação não está correta. Lipossomas são bicamadas artificiais compostas por 
fosfolipídeos, que formam vesículas. A penetração profunda de substâncias 
contidas no lipossoma.não é facilitada, já que estas vesículas se fundiriam com a 
primeira camada lipídica presente na pele (no caso a epiderme). De forma alguma 
desmembrariam células de gordura, já que estas vesículas sequer teriam acesso 
aos adipócitos. 
 
	Disciplina: Biologia Celular I