Aula 02 Histologia Humana - Métodos em HIstologia

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

MÉTODOS UTILIZADOS 
EM HISTOLOGIA 
Objetivo da aula: 
 
Compreender a imagem bidimensional 
de uma lâmina histológica e como ela 
se relaciona com a estrutura 
tridimensional da qual é originária 
1. Etapa: Fixação 
 
Um preparado 
microscópico ideal possui 
a forma, estrutura e 
composição molecular 
idênticas as que possuia 
no organimo vivo; 
 
1. Etapa: Fixação 
 
 O processo de fixação consiste em preservar a 
estrutura de tecidos e órgãos. Como? 
 
- Interrompe o metabolismo celular; 
- Evita a degradação enzimática das células e 
tecidos por autólise; 
- Mata microrganismos como bactérias, fungos 
ou vírus; 
 
 
1. Etapa: Fixação 
 
 O processo de fixação preserva a estrutura de 
tecidos e órgãos. Como? 
 
 
1. Etapa: Fixação 
 
 É feita com auxílio de reagentes químicos 
que estabilizam as moléculas presentes em 
uma estrutura; 
 
 Essa estabilização se dá pela formação de 
pontes, ligações químicas entre moléculas 
vizinhas; 
 
 
 
 Fixadores mais comuns: 
 
- Formaldeído; 
- Glutaraldeído; 
- Ácido acético; 
- Ácido pícrico; 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: 
 
 
 Formaldeído 
 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: 
 
 Formaldeído 
 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: Formaldeído 
 
- Forma pontes metilênicas ou etilênicas, 
principalmente entre grupos de aminoácidos; 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: Formaldeído 
 
- TÁ, E DAÍ?????? 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: Formaldeído 
 
- Proteínas paralisadas! 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: Formaldeído 
 
- É capaz de reduzir radicais amino, carboxil, 
oxidril e sulfidril de proteínas e ácidos 
nucléicos; 
 
 
 
 Como funcionam os fixadores: Formaldeído 
 
- Capaz de reduzir radicais de 
ácidos nucléicos??? 
 
 
 
2. Etapa: inclusão 
 
 Os fragmentos de tecidos e órgãos devem ser 
infiltrados com substâncias que proporcionem 
uma consistência rígida; 
 
 Para microscopia de luz, 
a parafina é o produto 
mais utilizado. 
 
2. Etapa: inclusão 
 
A água é extraída através de banhos 
com soluções de concentrações 
crescentes de etanol (70%, 80%, 90%, 
95% e 100%) 
 
 
70 80 90 95 100 
2. Etapa: inclusão 
 
O etanol é substituído por um solvente 
miscível em etanol e parafina líquida 
(ex: xilol) 
 
2. Etapa: inclusão 
 
O xilol é substituído por 
parafina líquida 
(600C); 
 
 Quando resfriado o 
tecido embebido em 
parafina se torna 
rígido; 
 
Parafina 
Tecido 
Parafina líquida 
Tecido 
3. Etapa: cortes 
 
Os blocos de parafina são levados a um 
micrótomo, onde são seccionados por uma 
lâmina de aço; 
 
 
 
 
 
Micrótomo 
3. Etapa: cortes 
 Cortes com espessura de 1 a 10 mm 
podem ser obtidos; 
 
Lâmina de aço 
Bloco de parafina 
Cortes finos 
contendo 
tecido 
3. Etapa: inclusão 
 
 Os cortes são 
colocados em banho-
maria aquecido onde 
esticam e são 
pescados! 
 
Cortes finos 
contendo 
tecido 
4. Etapa: coloração 
 Os cortes histológicos devem ser corados, 
 
 
 
 
 
 
 Como os corantes são solúveis em água, o 
procedimento reverso deve ser feito: xilol  
álcool 100%  90%  80%  70%  água  
coloração 
4. Etapa: coloração 
 
A maioria dos corantes se comporta 
como compostos ácidos ou básicos; 
 
Os componentes dos tecidos que se 
coram bem com corantes básicos são 
chamados basófilos e os com corantes 
ácidos, acidófilos 
 
4. Etapa: coloração 
 
Os corantes mais utilizados são a 
hematoxilina, um corante roxo, básico 
que se liga a substâncias basófilas e... 
 
 
 ... a eosina, um 
corante rosado, ácido, 
que se liga a 
estruturas acidófilas. 
 
 
MÉTODOS EM HISTOLOGIA 
4. Etapa: coloração 
 
 
 
4. Etapa: coloração 
 
 ... eosina e hematoxilina (HE) 
Microscopia 
 ótica -HE 
 
 
MÉTODOS EM HISTOLOGIA 
Microscopia ótica 
 
Finalmente, após aproximadamente 2 ou 
3 dias, as lâminas podem ser observadas 
ao microscópio; 
 
Por hoje é isso pessoal… 
 
 
 
 
 
 
 
Katiapaludo@gmail.com 
 
 
MÉTODOS EM HISTOLOGIA 
Tipos de secções 
Transversal: 
divide a estrutura 
em duas porções, 
uma superior e 
uma inferior; 
divide a estrutura 
no sentido do 
menor eixo; 
 
 
 
Tipos de secções 
Longitudinal: divide a estrutura em 
duas porções, direita e esquerda; 
secção feita no sentido da maior 
dimensão, no sentido do maior eixo. 
 
 
 
MÉTODOS EM HISTOLOGIA 
Luz: nome dado a cavidade interna de órgãos 
e estruturas